诺卡菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于诺卡菌属（Nocardia spp.）的快速、高灵敏度检测。适用于临床样本、环境样本及科研中诺卡菌DNA的定性或定量分析。

产品组成

PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液及荧光染料。

阳性对照：诺卡菌基因组DNA（1×10⁴ copies/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

说明书（即本文件）。

技术参数

检测限：≤10 copies/反应。

特异性：对诺卡菌属通用，与其他常见病原体无交叉反应。

保存条件：-20℃避光保存，有效期6个月；运输采用低温冷链。

实验步骤

样本制备

提取待测样本DNA（推荐柱式法或磁珠法），浓度建议50 ng–1 μg/μL。

PCR反应体系配制（50 μL体系）

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR预混液 | 25 |

| 引物混合液（10 μM）| 4 |

| DNA模板 | 1–5 |

| 无核酸酶水 | 补至50 |

扩增程序

预变性：95℃ 5 min；

循环阶段（35 cycles）：95℃ 30 s → 58℃ 30 s → 72℃ 45 s；

终延伸：72℃ 7 min。

数据分析

使用荧光定量PCR仪采集荧光信号，通过标准曲线计算样本中诺卡菌DNA浓度。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

试剂解冻后应充分混匀并短暂离心。

建议设置复孔以提高结果可靠性。

质量控制

阳性对照Ct值≤30，阴性对照无扩增曲线，否则实验无效。

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