幽门螺旋杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

技术原理

基于染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增幽门螺旋杆菌保守基因序列（如ureA、16S rRNA），SYBR Green等荧光染料嵌入双链DNA后释放信号，实时监测扩增曲线，通过Ct值判定目标基因拷贝数。

适用样本：胃黏膜组织、粪便、唾液、环境样本等。

用途：幽门螺旋杆菌感染的定性及定量检测，适用于科研与临床研究。

核心特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。

高特异性：引物针对幽门螺旋杆菌独特序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

即用型设计：预混反应液（含DNA聚合酶、dNTPs等），减少操作步骤。

稳定性：-20℃保存有效期12个月，低温运输确保试剂活性。

试剂盒组成

（以50次反应为例）

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| 2×qPCR预混液 | 1 mL | 含荧光染料、酶及缓冲液 |

| 幽门螺旋杆菌引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标基因 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 定量标准品 |

| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | 污染监测 |

| DNA模板稀释液 | 1 mL | 样本稀释 |

操作流程

样本DNA制备

推荐使用商品化DNA提取试剂盒（如磁珠法），或按粗提法（如沸水浴10分钟）处理样本。

反应体系配制（冰上操作）

每20μL体系：

2×预混液 10 μL

引物混合液 2 μL

模板DNA 5 μL

超纯水补足至20 μL。

PCR扩增程序

仪器兼容：ABI 7500、Bio-Rad CFX、LightCycler等。

程序：

95℃预变性10分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 30秒，采集荧光信号）。

数据分析

通过标准曲线（阳性对照梯度稀释）计算样本中目标基因拷贝数。

注意事项

防污染：实验分区操作（样本制备区、PCR配制区、扩增区），使用无核酸酶耗材。

质控要求：每批次实验需包含阴性对照（排除污染）和阳性对照（验证灵敏度）。

定量限制：线性范围需验证（通常覆盖10¹–10⁶拷贝/μL）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输方式：低温干冰或冰袋运输。

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