埃博拉病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒通过荧光探针法（染料法）定性检测人血清、血浆或全血样本中的埃博拉病毒（EBOV）RNA，适用于：

埃博拉出血热（EVD）的临床辅助诊断

疫情监控及病毒溯源研究

生物安全实验室病原体筛查

注意：不可作为唯一诊断依据，需结合流行病学史与临床表现综合判断。

检测原理

RNA提取：磁珠法/柱式法纯化病毒RNA

RT-PCR扩增：

一步法：逆转录（RT）与PCR扩增在同一反应体系中进行

染料检测：采用高灵敏度DNA嵌合染料（如SYBR Green I），与双链DNA结合释放荧光信号

定量分析：实时监测荧光强度，通过Ct值判定病毒载量

技术参数

| 指标 | 性能参数 |

| 检测靶基因 | EBOV NP基因（保守区） |

| 灵敏度 | ≤200 copies/mL |

| 特异性 | 与马尔堡病毒、拉沙病毒等无交叉反应 |

| 检测限（LoD） | 50 copies/reaction（95%阳性率）|

| 重复性 | CV ≤5%（高/中/低浓度样本） |

| 临床灵敏度 | 94.3%（n=105，WHO验证数据） |

| 临床特异性 | 99.1%（n=234） |

试剂盒组成

| 组分 | 体积/数量 | 储存条件 |

| RT-PCR预混液（含染料） | 1.2 mL × 2管 | -20℃避光 |

| EBOV阳性对照 | 200 μL × 1管 | -70℃以下 |

| 阴性对照 | 1 mL × 1管 | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1.5 mL × 1管 | 室温 |

| 耗材包（八联管、封膜）| 48测试 | 室温 |

检测流程

A[样本采集] --> B[RNA提取]

B --> C{是否成功?}

C --是--> D[配制PCR反应体系]

C --否--> E[重提/弃用]

D --> F[上机扩增]

F --> G[分析Ct值]

G --> H[结果判读]

结果判读标准

| 结果类型 | 判定条件（需同时满足） |

| 阳性 | Ct值 ≤38.0，S型扩增曲线，△Rn≥0.3 |

| 阴性 | Ct值=40或未检出，阴性对照正常 |

| 可疑 | 38.0<Ct值<40.0，需复测或测序确认 |

| 无效 | 阳性对照Ct>35/阴性对照出现扩增 |

生物安全警告

‼️ 操作要求：

实验需在BSL-3及以上实验室进行

样本灭活：推荐使用AVL病毒保存液（含胍盐）

废液处理：1%次氯酸钠浸泡24小时后高压灭菌

储存与运输

储存：-20℃避光保存（避免反复冻融＞3次）

有效期：12个月

运输：干冰（-70℃）或专用冷链箱（2-8℃ ≤72小时）

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