本迪布焦型埃博拉病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒适用于临床或科研中咽拭子、血清、组织渗出液等样本的本迪布焦型埃博拉病毒RNA的特异性检测。检测结果需结合临床表现及其他实验室指标综合判断，不可单独作为确诊依据。

检测原理

采用实时荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和荧光染料对病毒RNA进行扩增检测。反应体系为预混式设计（含酶、引物、缓冲液等），操作简便且可有效避免污染，实现高灵敏度、高特异性的快速检测。

试剂盒组成

预混反应液（含逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料等）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL）

阴性对照（无核酸酶水）

DEPC-H2O（无核酸酶水）

使用方法

样本处理（样本制备区）

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本RNA，建议使用带芯枪头以避免交叉污染。

标准曲线制备（独立操作区）

将阳性对照按10倍梯度稀释（如10^7至10^2拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。

PCR反应（扩增区）

每反应体系20 μL，加入5 μL模板RNA。

推荐扩增程序：逆转录（50°C 15分钟）→ 预变性（95°C 3分钟）→ 40循环（95°C 15秒，60°C 30秒，荧光采集）。

性能参数

检测限：≤100拷贝/mL

线性范围：10^2~10^7拷贝/μL（R²≥0.99）

特异性：不与苏丹型、扎伊尔型等其他埃博拉病毒亚型交叉反应。

注意事项

仅限专业机构使用，操作需符合生物安全二级（BSL-2）标准。

避免反复冻融试剂，开封后需分装保存。

定量结果需在标准曲线有效范围内判读。

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