洋葱伯克氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

洋葱伯克氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

性能特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，预混引物及反应体系优化完成。

高特异性：针对洋葱伯克氏菌保守基因区域设计引物，避免非特异性扩增。

高灵敏度：SYBR Green染料法检测，灵敏度显著高于常规PCR。

闭管操作：减少气溶胶污染风险。

兼容性广：适配ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

试剂盒组成

2×qPCR Magic Mix：500 μL（预混含SYBR Green染料、dNTPs、聚合酶等）。

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）。

qPCR引物混合液：100 μL（靶向洋葱伯克氏菌特异性序列）。

阳性质控品：50 μL（含目标基因片段）。

阴性质控品：50 μL（无核酸酶水）。

说明书：1份。

注意：不同批号组分不可混用，避免反复冻融（建议分装保存）。

储存与运输

保存条件：-20℃±5℃避光保存，有效期12个月，冻融次数≤7次。

运输条件：低温冰袋（2~8℃）运输，严禁反复冻融。

实验步骤

样本制备

采集样本（如胃液分泌物、培养物等）需符合《临床微生物样本采集规范》。

短期保存于-20℃，长期保存需-70℃以下（≤6个月）。

反应体系配制

按20μL体系混合：10μL 2×预混液、2μL引物混合液、2μL模板DNA、6μL无核酸酶水。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信号采集）；

熔解曲线分析（可选）。

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且有典型扩增曲线；

样本Ct≤35判为阳性，Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测确认。

注意事项

实验分区操作（样本处理区、扩增区），避免污染。

使用无核酸酶耗材（吸头、离心管等）。

熔解曲线分析可辅助验证扩增特异性。

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