脑膜炎败血金黄杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

脑膜炎败血金黄杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法实时荧光定量PCR技术，针对脑膜炎败血金黄杆菌基因保守区域设计特异性引物，通过体外核酸扩增及荧光信号监测，实现对该病原体的定性或定量检测。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

产品组成

2×qPCR MagicMix（500 μL，棕色管）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL，黄盖）

脑膜炎败血金黄杆菌PCR引物混合物（100 μL，白盖）

阳性对照（1×10^8 拷贝/μL，50 μL，红盖）

使用手册

自备试剂：DNA模板、10×ROX（依机型需求）。

技术参数

检测灵敏度：数百拷贝/反应。

反应体系：20 μL/管（推荐25 μL体系需调整分装量）。

特异性：与相近病原体无交叉反应。

规格：50次检测。

操作步骤

1. 样本处理

DNA提取：建议使用商品化细菌基因组DNA提取试剂盒（如离心柱法），提取后模板于-15℃以下保存。

2. 试剂配制

试剂解冻后振荡混匀，低速离心10秒。

按样本数（N=待测样本+1阴性对照+1阳性对照）分装20 μL/管至八联PCR管，避免强光照射。

3. 加样

分别加入5 μL待测DNA、阳性质控品、阴性质控品至对应反应管，短暂离心混匀。

4. PCR扩增

仪器设置：

反应体系：25 μL（需调整分装量）。

荧光通道：检测通道选SYBR Green I，淬灭通道选None（ABI系列仪器勿选ROX）。

循环参数：按说明书预设程序运行。

5. 结果分析

基线调节：若曲线倾斜，调整Baseline的start值（3~15）、stop值（5~20）。

阈值设定：拖动Threshold线至高于阴性对照。

结果判读：

阳性：Ct值≤35.0且呈指数扩增曲线。

可疑：Ct值>35.0需复测，复测Ct值≤38.0判为阳性。

注意事项

阳性对照稀释需在独立区域操作，避免污染。

试剂运输保存：-20℃避光保存，有效期1年。

实验分区操作（样本处理区、试剂准备区、核酸扩增区），防止交叉污染。

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