猪肠道杯状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪肠道杯状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green荧光定量RT-PCR技术，用于定性或定量检测猪肠道杯状病毒（PECV）RNA，适用于临床样本、环境监测及科研实验。

检验原理

特异性引物设计：针对猪肠道杯状病毒高度保守区域设计引物，确保扩增特异性。

荧光信号检测：SYBR Green染料与双链DNA结合后释放荧光，通过实时监测荧光信号强度实现定量分析。

标准曲线法：配套阳性标准品（无传染性RNA片段）可生成标准曲线，用于拷贝数定量。

主要组分

RT-PCR预混反应液（含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

猪肠道杯状病毒特异性引物混合液

阳性对照（非传染性RNA片段，10^6拷贝/μL）

阴性对照（DEPC水）

荧光PCR专用模板稀释液

储存及运输

-20℃避光保存，有效期12个月；低温运输（干冰或冰袋）。

操作步骤

样本处理：提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

反应体系配制（20μL/反应）：

预混反应液 10μL

引物混合液 2μL

模板RNA 5μL

DEPC水补至20μL

PCR程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

数据分析：

阈值循环数（Ct值）≤35判定为阳性；

定量分析需根据标准曲线计算拷贝数。

性能参数

灵敏度：最低检测限10^2拷贝/μL。

特异性：不与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、传染性胃肠炎病毒（TGEV）等发生交叉反应。

线性范围：10^2~10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需在无菌环境下进行，避免RNA酶污染。

阳性对照需单独存放，防止污染其他组分。

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