牛腺病毒3型 染料法荧光定量PCR 试剂盒

牛腺病毒3型 染料法荧光定量PCR 试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green I染料法实时荧光定量PCR技术，用于定性检测牛腺病毒3型核酸，适用于临床样本、环境样本及疫苗质量控制中的病原学检测。

检验原理

试剂盒针对牛腺病毒3型基因组保守区域设计特异性引物，通过PCR扩增目标序列，SYBR Green I染料与双链DNA结合后释放荧光信号。荧光定量PCR仪实时监测扩增曲线，通过Ct值判定样本中病毒核酸的存在及相对含量。

试剂组成

TB Green Premix Ex Taq II（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

牛腺病毒3型特异性引物（上下游各1管，序列见附录）

阴性对照（无核酸酶水）

阳性对照（含牛腺病毒3型靶序列的重组质粒）

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。

适用仪器

兼容ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler 480等主流荧光定量PCR仪。

检测流程

样本处理

采用磁珠法或离心柱法提取样本RNA/DNA，建议使用配套核酸提取试剂。

反应体系配制（20μL/反应）

TB Green Premix Ex Taq II：10μL

上下游引物（10μM）：各1μL

模板DNA/RNA：1.5μL

无核酸酶水：补至20μL

PCR扩增程序

预变性：95℃ 1分钟

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 51℃ 30秒（荧光采集）

熔解曲线分析：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒

结果判定

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线出现单一峰值。

可疑：35<Ct值≤40，建议重复检测。

阴性：无Ct值或熔解曲线异常。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阴阳性对照需同步检测，结果有效需满足：阳性对照Ct值≤30，阴性对照无扩增。

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