牛疱疹病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

牛疱疹病毒2型染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专为检测牛疱疹病毒2型（BHV-2）设计。通过保守序列引物实现高特异性扩增，灵敏度可达数百拷贝/反应，适用于病毒核酸的定性与定量分析。

产品特点

即开即用：预混反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需提供DNA模板。

高特异性：引物针对BHV-2保守区域设计，与相关病毒无交叉反应。

高灵敏度：检测下限为几百拷贝/反应。

闭管操作：一管式检测，避免气溶胶污染。

兼容性：适配常见荧光定量PCR仪（需自备ROX校正染料，依机型而定）。

组分与储存

| 成分 | 规格（50次） | 包装颜色 |

| 2×qPCR MagicMix | 500 μL | 棕色管 |

| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | 透明管 |

| 阳性对照（BHV-2 DNA）| 50 μL | 红色管 |

| 阴性对照（无核酸水） | 50 μL | 蓝色管 |

注意：

各组分需-20℃保存，避免反复冻融（建议分装使用）。

开盖前请短暂离心，防止液体残留。

实验操作

1. 样本准备

模板DNA浓度建议为10–100 ng/μL（纯度A260/A280≈1.8–2.0）。

使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照。

2. 反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR MagicMix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| ROX（依机型添加） | 0.4 |

| 无核酸水 | 补至20 |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95 | 3 min | 1 |

| 变性 | 95 | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60 | 30 sec | |

数据采集：在退火/延伸阶段读取荧光信号（FAM通道）。

结果判读

定量分析

以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性分析

阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40，或无扩增曲线。

可疑：35<Ct<40，需重复检测。重复后Ct<40判为阳性。

质量控制要求：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

实验环境需无核酸污染，建议在超净台或PCR工作站操作。

不同仪器需优化ROX浓度（详见仪器说明书）。

剩余试剂应严格密封保存，避免反复冻融（≤3次）。

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