查菲艾利希体（查菲埃立克体）染料法荧光定量PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定性检测人全血、血清或蜱虫样本中的查菲艾利希体（E. chaffeensis）特异性DNA片段。适用于：

人粒细胞埃立克体病（HGE）的辅助诊断

蜱媒病原体监测及流行病学研究

注意： 检测结果需结合临床症状及其他医学检查综合判断。

检测原理

采用 TaqMan 探针法荧光定量PCR技术：

特异性引物：靶向查菲艾利克体16S rRNA基因保守区域。

FAM标记探针：与扩增产物结合，释放荧光信号。

实时监测：通过荧光阈值循环数（Ct值）判定样本中病原体载量。

试剂盒组分

| 组分名称 | 48测试/盒 | 保存条件 |

| qPCR Master Mix | 1.2 mL | -20℃ |

| E. chaffeensis 引物探针混合液 | 120 μL | -20℃ |

| DNA 提取试剂（磁珠法） | 1套 | 室温 |

| 阳性对照（灭活E. chaffeensis DNA） | 100 μL | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL | -20℃ |

| RNase-Free Water | 1 mL | 室温 |

适用仪器

ABI 7500 / QuantStudio 5

Bio-Rad CFX96

Roche LightCycler 480

其他支持FAM通道的qPCR仪

检测流程

1. 样本前处理

血液/血清：使用配套DNA提取试剂盒提取核酸。

蜱虫样本：机械研磨后提取DNA。

2. qPCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| qPCR Master Mix | 10 μL |

| 引物探针混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 5 μL |

| RNase-Free Water | 3 μL |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 45 sec | |

| 荧光采集 | 60℃ | 采集 | |

结果判读

| 结果类型 | Ct值范围 | 判定标准 |

| 阳性 | Ct ≤ 35.0 | 有明显S型扩增曲线 |

| 可疑 | 35.0 < Ct ≤ 38.0 | 重复检测确认 |

| 阴性 | Ct > 38.0 或无Ct值 | 无扩增曲线 |

质控要求：

阳性对照：Ct ≤ 30.0

阴性对照：无扩增（Ct = Undetermined）

性能参数

灵敏度：检出限（LOD）为 10 copies/μL

特异性：

不交叉反应：腺热埃立克体（E. sennetsu）、嗜吞噬细胞无形体（A. phagocytophilum）

可识别查菲艾利克体所有已知亚型

精密度：批内/批间CV < 5%

注意事项

试剂开封后避免反复冻融（≤3次）。

操作全程需在无菌环境下进行，防止气溶胶污染。

阳性对照含灭活病原DNA，按生物安全二级（BSL-2）处理。

本试剂仅用于科研，临床诊断需取得国家药监局注册证。

储存与运输

储存：-20℃避光保存（有效期12个月）

运输：干冰或冰袋（-15℃以下）

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