反刍兽艾利希体（反刍兽埃立克体）染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒专为反刍兽艾利希体（Ehrlichia ruminantium）核酸的高灵敏检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术（如SYBR Green I），适用于反刍动物全血、血清、组织（脾、肝）及蜱虫样本的病原体定性与定量分析。

技术原理

通过特异性引物扩增反刍兽艾利希体的保守基因序列（如16S rRNA或表面抗原基因），SYBR Green染料与双链DNA结合后释放荧光信号。实时监测荧光强度，结合标准曲线计算目标核酸拷贝数。

试剂盒组成

| 成分 | 规格（50次） | 功能说明 |

| 2×SYBR qPCR预混液 | 500 μL | 含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 样本及对照稀释 |

| 反刍兽艾利希体引物 | 100 μL | 特异性扩增目标序列 |

| 阳性对照（定量） | 50 μL | 1×10⁸拷贝/μL标准品 |

| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | 监测污染及背景信号 |

核心特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。

高特异性：引物经严格验证，避免与近源病原体（如犬艾利希体）交叉反应。

操作便捷：预混液设计，减少配液步骤。

防污染：闭管操作，降低气溶胶污染风险。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

有效期：12个月。

操作流程

样本制备

样本类型：全血（EDTA抗凝）、组织匀浆液或蜱虫提取物。

DNA提取：推荐柱式法提取或热裂解法（100℃ 10分钟）。

反应体系配制（20 μL/反应）

2×SYBR预混液     10 μL  

引物混合物        2 μL  

模板DNA          2 μL  

稀释液补至       20 μL  

PCR程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

熔解曲线分析：60℃~95℃，0.5℃/步

注意事项

引物干粉需离心后以165 μL超纯水复溶，未用完部分-20℃保存。

不同批号试剂不可混用。

实验需设置阴性/阳性对照以监控假阴性或污染。

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