诺如病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

诺如病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR技术，针对诺如病毒GI和GII型基因组高度保守区域设计特异性引物及探针（FAM/Cy5双通道标记），适用于粪便、呕吐物等临床样本中诺如病毒核酸的定性及定量检测。检测灵敏度达100拷贝/反应，特异性强，无交叉反应。

检测原理

通过逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA，随后采用荧光探针法对目标基因进行扩增，实时监测荧光信号，实现病毒载量分析及分型（GI/GII）。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/7900系列

Roche LightCycler

Bio-Rad iCycler

Qiagen Rotor-Gene

试剂盒组成

探针法qRT-PCR缓冲液（0.5 mL×1管）

酶混合液（含逆转录酶及Taq DNA聚合酶，1 mL×1管）

阳性对照（250 μL×1管，含诺如病毒GI/GII型靶序列）

阴性对照（250 μL×1管，无RNA酶水）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL×1管）

自备试剂

样本RNA提取试剂（推荐磁珠法或离心柱法）

无RNA酶超纯水

储存与运输

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期2年；低温运输。

操作步骤

RNA提取

使用病毒RNA提取试剂盒处理样本，建议提取后立即检测或-80℃保存。

反应体系配制

每反应需加入：10 μL缓冲液、0.5 μL酶混合液、5 μL模板RNA，补超纯水至20 μL。

阴性/阳性对照需单独设孔。

PCR程序设置

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）

结果判读

阳性：FAM（GI型）或Cy5（GII型）通道Ct值≤35，且扩增曲线呈S型。

阴性：无Ct值或Ct值＞38。

注意事项

本试剂仅限科研使用，不可用于临床诊断。

不同批号组分禁止混用。

操作时需分区进行（样本处理、试剂配制、扩增分析），避免污染。

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