人偏肺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

人偏肺病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于 实时荧光定量 RT-PCR 技术，采用 DNA 染料法（如 SYBR Green I）对人偏肺病毒（HMPV）的保守基因区域（通常为 N 基因 或 L 基因）进行特异性检测。适用于呼吸道样本（咽拭子、鼻拭子、肺泡灌洗液等） 中 HMPV RNA 的定性检测，辅助临床感染诊断与流行病学研究。

检测原理

RNA 提取：样本中病毒 RNA 经纯化后作为模板。

反转录 (RT)：逆转录酶将 RNA 反转录为 cDNA。

荧光定量 PCR：

特异性引物扩增 HMPV 靶序列。

DNA 嵌入染料 与双链 DNA 结合，荧光信号随扩增产物增加而增强。

实时监测荧光强度，生成扩增曲线，通过 Ct 值 判断病毒载量。

试剂盒组分（48 测试）

| 组分名称 | 体积/数量 | 储存条件 |

| HMPV RT-PCR 反应预混液 | 1.2 mL × 2 管 | -20℃ |

| RT Enzyme Mix | 100 μL × 1 管 | -20℃ |

| HMPV Positive Control | 200 μL × 1 管 | -20℃ |

| Nuclease-Free Water | 1 mL × 1 管 | 常温 |

| RNase-Free 离心管 | 50 个 | 常温 |

适用仪器

兼容主流荧光定量 PCR 仪：

Bio-Rad CFX, ABI 7500/QuantStudio, Roche LightCycler 480, Qiagen Rotor-Gene。

性能参数

| 指标 | 性能 |

| 灵敏度 | ≤ 50 拷贝/反应 |

| 特异性 | 不与流感病毒、RSV、SARS-CoV-2 等交叉反应 |

| 检测限 (LoD) | 5×10⁰ copies/μL |

| 重复性 | CV ≤ 5% (Ct 值) |

操作步骤

样本前处理

用商用 RNA 提取试剂盒（如 QIAamp Viral RNA Mini Kit）提取样本 RNA，溶于 60 μL 无核酸酶水。

PCR 反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 (μL) |

| RT-PCR 预混液 | 15 |

| RT Enzyme Mix | 1 |

| 模板 RNA | 4 |

扩增程序（以 ABI 7500 为例）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 反转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 关闭 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 关闭 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 开启 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

结果判读

Ct 值 ≤ 38：HMPV 阳性

Ct 值 > 38 或无扩增：HMPV 阴性

阳性对照：Ct ≤ 32

阴性对照：无扩增曲线

熔解曲线分析（必须执行）：

扩增结束后进行 65℃→95℃ 熔解曲线分析（0.5℃/s），确认单一熔解峰（Tm ≈ 85℃±1℃），排除非特异扩增。

注意事项

实验室分区：严格分离试剂准备区、样本处理区、扩增区。

防污染：使用带滤芯吸头，穿戴一次性防护装备。

试剂保存：避免反复冻融（预混液分装使用）。

质控要求：每批次实验必须包含阴/阳性对照和空白对照。

临床解释：结果需结合患者症状与流行病学综合判断。

局限性

样本采集不当可能导致假阴性。

病毒基因变异可能影响检测灵敏度（设计已覆盖主要流行株）。

不能区分活病毒与非感染性病毒 RNA。

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