古柏线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

古柏线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green荧光染料法技术，专门用于检测和定量分析样本中的古柏线虫核酸。适用于科研领域对古柏线虫感染的检测与研究，不用于临床诊断。

技术原理

本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法qPCR技术：

针对古柏线虫基因组高度保守区(如ITS区域或线粒体基因)设计特异性引物

SYBR Green染料可非特异性结合所有双链DNA产物

PCR扩增过程中，随着产物积累，荧光信号增强

仪器实时监测荧光信号，通过Ct值判断样本中目标核酸的存在及初始拷贝数

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格 | 主要功能 |

| 2×SYBR qPCR Mix | 500μL-1mL | 预混液，含Taq酶、dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等 |

| PCR引物混合液 | 100μL | 特异性扩增古柏线虫目标片段 |

| 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL) | 50μL | 含目的基因片段的质粒或DNA |

| 模板稀释液 | 1mL | 用于稀释阳性对照或溶解DNA模板 |

| ROX参比染料(可选) | 50μL | 用于校正孔间荧光差异 |

产品特点

高灵敏度：可检测低至10ng的基因组DNA或10³拷贝/μL的标准品

宽线性范围：跨越7个数量级(10¹-10⁸拷贝/μL)

操作简便：一管式闭管操作，减少污染风险

稳定性好：-20℃保存12个月性能不变

操作流程

样本DNA制备

使用合适方法纯化样本DNA(如柱式法)

设置阳性对照(含10μL古柏线虫阳性对照的1000倍稀释液)和阴性对照(水)

样本短期保存于2-8℃(不超过72小时)，长期保存于-70℃(避免反复冻融)

PCR反应体系配置(20μL体系)

在PCR管中加入：

2×SYBR qPCR Mix 10μL

引物混合液 2μL

模板DNA 8μL(包括样品、阳性/阴性对照)

轻微离心混匀

扩增程序

预变性：95℃ 5分钟

40个循环：

变性：95℃ 15秒

退火/延伸：60℃ 30秒(采集荧光信号)

熔解曲线分析(可选)：65℃-95℃，每0.5℃增加，停留5秒

结果分析

根据标准曲线计算样本中目标核酸的初始拷贝数

熔解曲线分析可确认扩增产物的特异性(单一峰表示特异性扩增)

注意事项

实验分区操作：样本制备区、试剂配制区、扩增区

避免试剂反复冻融，使用前充分混匀

不同仪器可能需要调整ROX参比染料用量

熔解曲线分析有助于排除非特异性扩增

本产品仅用于科研用途

质量控制

阳性对照：Ct值应在预期范围内

阴性对照：无扩增曲线

NTC(无模板对照)：无扩增信号

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