短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒

短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

技术原理

基于染料法荧光定量PCR（SYBR Green I技术），通过特异性引物扩增短古柏线虫保守基因序列（如ITS或COI基因）。染料与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增曲线，通过Ct值实现定性与定量分析。

核心特点

高特异性：引物针对短古柏线虫专属序列设计，避免与其他线虫（如蛔虫、钩虫）交叉反应。

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，部分版本可达10²拷贝/毫升。

操作便捷：预混反应液（含DNA聚合酶、dNTPs等），即开即用。

防污染设计：一管式闭管操作，减少气溶胶污染风险。

试剂组成（以50次反应为例）

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管）| 含预混酶、缓冲液及dNTPs |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（黄盖） | 样本稀释及阴性对照 |

| 短古柏线虫qPCR引物混合液 | 100μL（白盖） | 特异性扩增目标基因 |

| SYBR Green I染料 | 50μL（避光管）| 荧光信号标记双链DNA |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（红盖） | 定量标准品 |

操作流程

样本制备

样本类型：粪便、肠内容物、组织（如肠道、淋巴结）。

DNA提取：推荐配套柱式提取试剂盒，确保纯度（A260/A280≈1.8-2.0）。

反应体系配制（冰上操作）

典型体系（20μL）：

2×qPCR MagicMix：10μL

引物混合液：2μL

SYBR Green I染料：1μL

模板DNA：2μL

超纯水补至20μL

PCR扩增程序

仪器兼容：ABI 7500、LightCycler等。

程序设置：

95℃预变性5分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 45秒，采集荧光信号）。

结果分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性判定：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35；可疑（35<Ct<40）需复测。

注意事项

储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。

污染控制：分区操作（样本处理区、PCR扩增区），使用带滤芯枪头。

自备试剂：DNA模板、10×ROX校正染料（依机型需求）。

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