伊丽莎白巴尔通体染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于伊丽莎白巴尔通体（Bartonella spp.）的核酸定性及定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度和特异性，可检测低至10^2拷贝/μL的靶标DNA，线性范围覆盖5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。

试剂盒组成

PCR反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。

阳性对照：无传染性的DNA片段（1×10^8拷贝/μL），用于标准曲线制备及假阴性判定。

模板稀释液：用于标准品梯度稀释。

其他组分：DEPC-H2O或专用稀释液。

注：本试剂盒不含核酸提取试剂，需用户自行制备DNA模板。

操作步骤

标准曲线制备（样本制备区）

标记离心管：取6管，分别标记为7、6、5、4、3、2。

稀释阳性对照：

向每管加入45 μL模板稀释液（需使用带芯枪头）。

7号管中加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），每步更换枪头并充分震荡。

保存：稀释后标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

PCR反应体系配置（反应配制区）

体系组成（20 μL/反应）：

预混液10 μL

引物混合液2 μL

模板DNA 2 μL（样本或标准品）

DEPC-H2O补足至20 μL。

分装：建议设置3复孔以提高准确性。

荧光定量PCR程序

循环条件：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）：60–95℃逐步升温。

注意事项

分区操作：标准品稀释与样本处理需在独立区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）及标准曲线（R²≥0.99）。

数据判读：定量结果需基于标准曲线计算；熔解曲线单峰表明扩增特异性。

性能参数

特异性：引物针对巴尔通体保守序列设计，无交叉反应。

灵敏度：最低检测限10^2拷贝/μL。

稳定性：-20℃保存有效期12个月，避免反复冻融。

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