猪札如病毒(札幌病毒)染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品用途

本试剂盒用于检测猪全血、扁桃体、淋巴结、脾脏、肺及鼻腔拭子等样本中的猪札如病毒（札幌病毒）核酸，适用于兽医诊断、疫病监测及科研领域。

试剂盒组成

预混反应液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR增强剂及荧光染料。

标准品：原倍浓度标准品1支，需按说明书梯度稀释。

阴性/阳性对照：用于实验质控。

样品稀释液：用于待测样本预处理。

储存条件及有效期

储存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（以包装标注为准）。

实验前准备

试剂平衡：使用前1小时将试剂盒置于室温平衡。

仪器校准：确保移液器误差≤2%，推荐使用20μL、50μL、100μL及1000μL规格枪头，并避免交叉污染。

样本处理：采集的样本需按规范提取核酸，避免降解。

操作步骤

标准品稀释（示例梯度）：

原倍标准品（24μg/mL）按1:1比例稀释，依次生成12μg/mL、6μg/mL、3μg/mL、1.5μg/mL的标准曲线浓度。

加样体系：

反应体系：20-30μL/孔，包括模板DNA 5μL、预混液15μL、引物探针混合液5μL。

设置空白孔（无模板对照）、标准品孔及样本孔（样本需先以稀释液5倍稀释）。

PCR程序：

反转录：45℃ 10分钟（若含RNA步骤）。

预变性：95℃ 30秒。

扩增循环：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒，共40个循环。

结果判定

阈值设定：以扩增曲线指数期起始点为基线。

CT值分析：

CT值≤35且曲线呈S型：判为阳性。

CT值＞35或无扩增：判为阴性。

质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照CT值在预期范围内。

注意事项

实验全程需分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

底物需避光保存，加样时避免产生气泡。

推荐双孔复检，确保数据准确性；异常结果需通过其他方法验证。

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