气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增气单胞菌（Aeromonas spp.）保守基因序列。染料与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶标核酸的定性与定量分析。

技术特点：

高灵敏度：检测下限可达100拷贝/反应。

高特异性：引物针对气单胞菌高度保守区设计，避免交叉反应。

宽线性范围：定量检测时覆盖至少5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL）。

即用型设计：预混MasterMix，简化操作流程。

试剂组成

| 名称 | 规格 |

| 2× SYBR qPCR MasterMix | 0.5 mL×1管 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL×1管 |

| 气单胞菌阳性对照 | 50 μL×1管（含靶标DNA） |

| 无核酸酶水 | 1 mL×1管 |

操作步骤

样本制备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制（20 μL/反应）：

2× SYBR MasterMix：10 μL

引物混合液（需另购或按说明书稀释）：2 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

PCR程序设置：

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃递增

结果判读

定性分析：Ct值≤35且熔解曲线呈单峰视为阳性。

定量分析：通过标准曲线计算样本拷贝数。

假阴性排查：阳性对照Ct值正常则实验有效。

注意事项

避免反复冻融试剂，使用前需充分混匀。

操作区需严格分区（样本处理、PCR配制、扩增区），防止污染。

熔解曲线异常可能提示引物二聚体或非特异性扩增，需优化条件。

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