嗜水气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

嗜水气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增嗜水气单胞菌的保守基因序列。染料与双链DNA结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级，适用于定性和定量检测。

试剂组成

2×SYBR qPCR MasterMix：含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系（0.5 mL/管）。

荧光PCR专用模板稀释液：用于标准曲线制备或样品稀释（1 mL/管）。

阳性对照：嗜水气单胞菌标准品（浓度标注），用于排除假阴性。

阴性对照：无核酸酶水，确保无污染。

性能特点

高特异性：引物针对嗜水气单胞菌独特序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混MasterMix减少操作步骤，提升重复性。

快速扩增：配合快速PCR仪可在1小时内完成检测。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系：按20 μL体系配制（模板DNA 2 μL + MasterMix 10 μL + 引物混合液 2 μL + 稀释液补足）。

PCR程序：

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。

结果判读

定量分析：通过标准曲线计算拷贝数。

熔解曲线：单一峰表明扩增特异性，杂峰提示污染或非特异性扩增。

注意事项

避免反复冻融试剂，使用前需充分混匀。

实验环境需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）以防止污染。

若Ct值＞35，建议重复检测或重新采样。

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