温和气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

温和气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒采用染料法（SYBR Green I）荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增温和气单胞菌的保守基因序列。扩增过程中，SYBR染料与双链DNA结合发出荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级，兼具定性与定量功能。

试剂组成

2× SYBR qPCR MasterMix：含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲液（0.5 mL/管）。

荧光PCR专用模板稀释液：用于标准品梯度稀释（1 mL/管）。

阳性对照：含温和气单胞菌靶序列，用于验证实验有效性。

阴性对照：无DNA模板，排除污染干扰。

性能特点

高特异性：引物针对温和气单胞菌独特保守区设计，避免交叉反应。

高灵敏度：最低检测限100拷贝/反应。

快速便捷：即开即用，无需额外优化。

稳定性：-20℃保存下有效期12个月，运输需低温条件。

操作步骤

样本制备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系：按20 μL体系混合模板DNA、引物、MasterMix及稀释液。

PCR程序：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

数据分析：通过标准曲线计算样本中目标基因拷贝数。

注意事项

避免反复冻融试剂，解冻后需充分混匀。

实验需在无核酸污染环境下进行，建议使用UDG酶防污染体系。

定量分析时需设置重复孔及标准品梯度。

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