不明血吸虫染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法实时定量PCR技术，针对不明血吸虫基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测靶标核酸的扩增过程，实现定性及定量检测。扩增过程中，荧光信号强度与模板浓度成正比，通过标准曲线计算样本中目标核酸的拷贝数。

试剂组成

不明血吸虫扩增液：50μL×1管

不明血吸虫反应液：950μL×1管

阳性质控品（无传染性DNA片段）：50μL×1管（1×10^8拷贝/μL）

阴性质控品（无核酸酶水）：50μL×1管

说明书：1份

注意事项

不同批号组分不可混用。

试剂盒内组分可满足50次检测，需避免反复冻融（≤7次）。

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，有效期12个月；运输需使用干冰或-20℃冰袋。

适用仪器

兼容ABI系列（如7500）、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler、Eppendorf Mastercycler等荧光定量PCR仪。

自备耗材与设备

无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL离心管）

滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）

离心机、涡旋振荡器、移液器

样品要求

样本类型：粪便、血液或组织样本（需符合《寄生虫病样本采集规范》）。

保存条件：短期-20℃保存，长期需-70℃；避免反复冻融。

运输：2~8℃冰袋运输，严禁高温暴露。

使用方法

样本处理

按标准方法提取样本DNA（推荐柱提法或磁珠法）。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL）制备标准曲线。

PCR反应体系配制（样本处理区）

每反应体系20μL：

反应液 18μL

扩增液 1μL

模板DNA 1μL

扩增程序

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60~95℃（验证扩增特异性）

结果判读

定性：Ct值≤35且熔解曲线为单峰判为阳性。

定量：通过标准曲线计算模板拷贝数。

局限性

仅用于科研，不可作为临床诊断依据。

需严格分区操作（样本处理区、扩增区），避免污染。

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