尼泊尔葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次反应/盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次）。

运输条件：低温（≤4℃）、避光。

有效期：12个月（生产日期见包装标签）。

适用范围：仅供科研使用，不可用于临床诊断或动物检测。

质控标准

阴性质控品：检测结果应为阴性（无指数扩增期，Ct≥40或无Ct值）。

阳性质控品：检测结果应为阳性（明显指数扩增期，Ct≤35）。

有效性判定：同一实验中阴/阳性质控需同时满足上述条件，否则实验无效。

试剂盒组分

PCR反应液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、荧光染料等（需按实际组分调整）。

DNA聚合酶：热启动酶，需离心后使用。

阴性质控品：无核酸酶水。

阳性质控品：含S. nepalensis特异性片段。

说明书：1份。

实验步骤

样本处理（样本处理区）：

待检样本需提取DNA（推荐使用商业化核酸提取试剂盒）。

阴/阳性质控品可直接使用，无需提取。

反应体系配制（PCR准备区）：

每反应管加入：

PCR反应液 19 μL

DNA聚合酶 1 μL

短暂离心混匀后分装至PCR管。

加样（样本处理区）：

加入5 μL待测DNA或质控品至对应反应管，盖紧离心（6000 rpm，10秒）。

扩增程序设置（扩增区）：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

基线设定：建议选择6-15循环（根据扩增曲线调整）。

结果分析

阈值设定：以扩增曲线指数期起始点上方3-10倍标准差为基准。

Ct值判定：

阳性：Ct≤35且曲线呈典型S型；

阴性：无Ct值或Ct≥40。

注意事项

实验分区操作，避免污染。

试剂使用前需完全解冻并混匀，避免反复冻融。

不同仪器需优化扩增参数，建议优先选用ABI 7500、Bio-Rad CFX等机型。

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