蜡样芽胞杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

蜡样芽胞杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用荧光染料法，专用于蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）的快速、高灵敏度定量或定性检测。适用于食品、环境样本及临床标本中病原菌的核酸分析。

组分与保存条件

主要组分

荧光染料预混液（避光保存，含DNA结合染料，激发/发射波长分别为471 nm/530 nm）。

阳性对照（蜡样芽胞杆菌标准品）。

阴性对照（无模板对照）。

反应缓冲液。

保存条件

未开封组分需-20℃避光保存，避免反复冻融（冻融次数≤3次）。

解冻后试剂建议短暂离心后使用。

操作步骤

1. 样本处理

按标准方法提取待测样本DNA，建议使用商业核酸提取试剂盒以确保纯度。

2. PCR反应体系配置（25 μL体系）

加入12.5 μL预混液、1 μL引物探针混合液、5 μL模板DNA，补足无核酸酶水至25 μL。

注意：操作时需穿实验服并佩戴手套，避免荧光染料暴露于光线下。

3. 仪器设置

荧光通道：选择FAM检测通道（淬灭通道设为None），ABI系列仪器无需ROX校正。

循环参数：

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 荧光采集 |

| 预变性 | 95℃ | 2 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 45 | 否 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 45 | 是 |

结果分析

定量检测

以阳性对照浓度的log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，通过待测样本Ct值推算浓度。

定性检测

阴性判定：Ct值≥40或无扩增曲线。

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线典型。

灰区样本（Ct 35-40）：需重复检测，若重复结果<40则判为阳性。

注意事项

实验环境需避免交叉污染，建议使用超净工作台。

试剂解冻后需混匀并瞬时离心，避免气泡影响加样精度。

若检测环境存在抑制剂（如食品样本），建议稀释模板或增加纯化步骤。

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