西尼罗病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量RT-PCR技术开发，用于特异性检测西尼罗病毒RNA。其核心设计以西尼罗病毒E基因保守片段为靶标，包含优化的引物、探针及内标系统，适用于科研实验中对西尼罗病毒感染、隐性感染或低病毒载量样本的高灵敏度检测。

主要组分

PCR混合液：预混dNTPs、缓冲液及荧光染料。

引物与探针：

特异性引物对：

正向引物：5′-CGTCTGTTCAAAGGCTTTCAA-3′

反向引物：5′-GATAGGAACTTTGCAAGGTCCA-3′

特异性探针：5′-CTCCCGCAGACACAGGTCACGGC-3′（标记荧光报告基团与淬灭基团）。

内标系统：假病毒内标溶液及内标探针（5′-CTGCAGGCAACGCAGCCGTCACC-3′），用于监控提取与扩增效率。

质控品：

阳性质控品（含西尼罗病毒靶序列）

阴性质控品（无核酸酶水）

其他：Taq DNA聚合酶、DEPC-H₂O、定量标准品（梯度稀释）。

技术特点

高特异性：引物探针针对E基因保守区设计，避免与其他病原体交叉反应。

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒RNA。

定量能力：通过标准曲线实现绝对定量。

防污染设计：内标探针监控假阴性，减少操作误差。

即开即用：预混试剂简化操作流程。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月（生产日期见包装标签）。

实验流程

RNA提取：使用兼容的RNA提取试剂盒处理样本。

反应体系配制：按说明书比例混合PCR混合液、引物探针、模板RNA及内标。

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）

结果分析：根据阈值循环数（Ct值）和标准曲线计算病毒载量，内标验证有效性。

注意事项

实验需在PCR洁净环境下操作，避免气溶胶污染。

阴性质控品应无扩增信号，阳性质控品Ct值需在预期范围内。

详细操作步骤及数据分析方法请参阅完整版说明书。

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