克雷伯菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，专为克雷伯菌属（Klebsiella spp.）的快速、高灵敏度检测而设计。适用于临床样本、环境监测及科研实验中克雷伯菌的定性和定量分析，检测限可达数百拷贝/反应。

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期1年。

适用范围：科研用途，严禁用于临床诊断或其他非科研场景。

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格/数量 |

| 2×SYBR qPCR MasterMix | 500μL |

| 克雷伯菌通用引物干粉 | 50T（需复溶） |

| 阳性对照（无传染性DNA） | 50μL（1×10^7拷贝/μL） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 超纯水 | 1mL |

实验流程

样本准备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

引物复溶：离心引物干粉后，加入110μL超纯水混匀，分装保存于-20℃。

反应体系配制（20μL/反应）：

2×SYBR MasterMix：10μL

正向/反向引物：各0.5μL

DNA模板：2μL

超纯水补足至20μL。

PCR程序：

预变性：95℃ 5min

循环阶段（40 cycles）：95℃ 10s → 60℃ 30s（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃~95℃，升温速率0.5℃/s。

数据分析

定性检测：熔解曲线单峰且Ct值≤35判为阳性。

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本拷贝数。

注意事项

操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。

阳性对照需与样本分区域处理，使用带滤芯枪头。

若用于定量，需确保标准曲线线性范围覆盖10^1~10^6拷贝/μL。

试剂开封后需短暂离心，避免液体挂壁。

性能参数

特异性：针对克雷伯菌属保守序列设计，与其他常见病原体无交叉反应。

灵敏度：最低检测限100拷贝/反应（视样本质量可能波动）。

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