产酸克雷伯菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术特异性检测产酸克雷伯菌的核酸（如16S rRNA或特异性基因片段），适用于临床样本、环境样本或培养物的快速检测。

检测原理

特异性引物：针对产酸克雷伯菌保守序列设计引物，扩增目标DNA。

荧光信号：SYBR Green I染料与双链DNA结合后发射荧光，通过仪器实时监测扩增曲线。

定量分析：通过Ct值与标准曲线对比，计算样本中目标基因的拷贝数。

组分列表

| 组分名称 | 规格（50T） | 储存条件 |

| qPCR预混液（含SYBR Green I） | 1 mL × 2管 | -20℃避光 |

| 产酸克雷伯菌引物混合液 | 100 μL × 1管 | -20℃ |

| 阳性对照（产酸克雷伯菌DNA） | 50 μL × 1管 | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL × 1管 | 室温 |

| DNase/RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室温 |

储存与稳定性

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

实验步骤

1. 样本DNA提取

使用商品化DNA提取试剂盒（如TIANamp细菌DNA Kit）处理样本。

2. qPCR反应体系配制

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 1 |

| 模板DNA | 2 |

| DNase-Free水 | 补至20 μL |

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 | 否 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | 是 |

| 熔解曲线 | 60-95℃ | 梯度升温 | 1 | 是 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线为单一峰。

阴性：无Ct值或Ct值＞38。

重复验证：临界值（35＜Ct≤38）需复测。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

熔解曲线出现多峰提示非特异性扩增，需优化条件。

试剂解冻后需彻底混匀，避免气泡影响荧光信号。

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