沃氏葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

沃氏葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

试剂盒组成

PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、荧光染料（如SYBR Green）、PCR增强剂。

阳性对照：沃氏葡萄球菌特异性DNA片段。

阴性对照：无核酸酶水。

其他组分：稀释液、溶解液（部分提供）。

实验原理

通过荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合释放荧光信号，实时监测PCR扩增过程，定量检测样品中沃氏葡萄球菌的DNA浓度。

性能参数

特异性：引物经生物信息学验证，仅扩增沃氏葡萄球菌靶序列，与近缘菌无交叉反应。

灵敏度：最低检测限达10³ CFU/mL，无需增菌培养。

重现性：批内与批间变异系数＜5%。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA（建议浓度≥10 ng/μL）。

反应体系配制（示例）：

预混液 20 μL

模板DNA 2 μL

引物混合液 2 μL

无核酸酶水补至25 μL。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 30秒 → 60℃ 30秒（荧光采集） → 72℃ 30秒

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温。

结果判读

阳性：Ct值≤35，且熔解曲线呈现单一峰值。

阴性：无Ct值或熔解曲线异常。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照需单独存放，防止污染其他试剂。

若样本无扩增，建议稀释后复测以排除抑制剂干扰。

应用范围

适用于临床标本、环境样本及食品中沃氏葡萄球菌的快速定量检测，仅供科研使用。

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