中间葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

中间葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专为中间葡萄球菌（Staphylococcus intermedius）的快速、高灵敏度检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术，适用于科研用途。试剂盒包含预混优化引物、反应体系及对照，可实现定性或定量分析，灵敏度达数百拷贝/反应。

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，无需额外优化引物或反应条件。

高特异性：引物基于中间葡萄球菌保守序列设计，避免与其他病原体交叉反应。

灵敏度与线性范围：检测下限为几百拷贝/反应，定量线性范围覆盖5个数量级。

防污染设计：一管式闭盖检测，减少气溶胶污染风险。

标准化操作：50次20μL反应体系，兼容常见荧光定量PCR仪。

运输与保存

运输条件：低温运输（冰袋或干冰）。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。避免反复冻融。

自备试剂与仪器

DNA模板：需用户自行提取（推荐使用兼容的核酸提取试剂盒）。

ROX校正染料：根据机型需求准备10×ROX（参见仪器说明书）。

仪器：荧光定量PCR仪（需支持SYBR Green I通道）。

实验步骤

1. DNA提取

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280比值1.8-2.0。

2. 反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×PCR预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| ddH₂O | 6 |

注：阳性对照与阴性对照需同步设置。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95 | 3 min | 1 |

| 变性 | 95 | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60 | 30 sec | |

数据采集：退火/延伸阶段结束时采集荧光信号（SYBR Green I通道）。

数据分析

定量检测

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。

通过待测样本Ct值推算DNA浓度（log值），反演实际浓度。

定性检测

阴性判定：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性判定：Ct≤35且呈现典型S型扩增曲线。

灰区样本：Ct值35-40需重复检测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

实验分区操作：样本制备区、PCR反应配制区、扩增区需严格分离。

避免污染：使用无菌耗材，操作时更换手套。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

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