唾液乳酸杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

唾液乳酸杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒采用染料法实时荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增唾液乳酸杆菌靶基因，结合荧光染料与双链DNA结合释放的信号，实现定量检测。溶解曲线分析（Tm值）用于区分特异性扩增与非特异性产物，确保数据有效性。

结果判定标准

有效Ct值判定：待测样品Tm值与阳性对照一致时，Ct值有效；若Tm值不符，判定为假阳性，数据无效。

阴性对照要求：

若阴性对照出现假阳性（Tm值与阳性对照一致），提示可能存在PCR产物污染，实验需终止并排查污染源。

若阴性对照为真阴性，可继续分析其他有效数据。

定量分析：以阳性对照浓度的log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算待测样本DNA浓度。

试剂盒组分

反应液：500μL×2管（含PCR缓冲体系及荧光染料）

酶液：50μL×1管（含热启动DNA聚合酶）

阳性质控品：250μL×1管（已知浓度唾液乳酸杆菌DNA）

阴性质控品：250μL×1管（无模板对照）

说明书：1份

适用仪器

支持ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。

操作流程

样本处理：按标准方法提取待测样本DNA。

反应体系配制：按说明书比例混合反应液、酶液及模板DNA。

PCR扩增：按预设程序运行（建议参数：预变性95℃ 3min；40循环×95℃ 15s→60℃ 30s）。

溶解曲线分析：扩增结束后进行熔解曲线检测（60℃→95℃，升温速率0.5℃/s）。

注意事项

不同批号试剂不可混用。

实验环境需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

若阴性对照异常，需重新评估实验条件。

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