鸭肝炎病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒用于检测鸭类样本(如肝脏组织、粪便、血清等)中鸭肝炎病毒2型的RNA，适用于DHV-2感染的快速诊断和流行病学调查。

检验原理

采用特异性引物和TaqMan探针，通过一步法RT-qPCR技术对DHV-2 RNA进行检测

探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团

PCR扩增时，Taq酶发挥5'→3'外切酶活性，使探针水解，释放荧光信号

通过实时监测荧光信号变化，实现对靶标RNA的定量检测

主要组成成分

| 组分 | 48T含量 | 96T含量 |

| DHV-2 RT-qPCR反应液 | 12×1.0mL | 24×1.0mL |

| DHV-2酶混合液 | 12×40μL | 24×40μL |

| DHV-2阳性对照 | 1×50μL | 1×50μL |

| DHV-2阴性对照 | 1×50μL | 1×50μL |

| RNase-free水 | 1×1mL | 1×1mL |

样本要求

样本类型：肝脏组织、粪便、血清等

采集后应尽快处理，或-70℃保存

避免反复冻融

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月

适用仪器

ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等常见荧光定量PCR仪

检验方法

RNA提取：使用商品化RNA提取试剂盒提取样本RNA

反应体系配制（20μL体系）：

RT-qPCR反应液 15μL

酶混合液 1μL

模板RNA 4μL

反应程序：

50℃ 30min (反转录)

95℃ 10min (预变性)

95℃ 15sec → 60℃ 1min，45个循环

结果判定

阈值设定：取3-15个循环的荧光信号标准差的10倍

阳性判定：Ct值≤35且有典型扩增曲线

阴性判定：无Ct值或Ct值>35

性能指标

灵敏度：可检测到10 copies/μL的DHV-2 RNA

特异性：不与DHV-1、DHV-3及其他常见鸭病原体交叉反应

重复性：Ct值变异系数(CV)≤5%

注意事项

实验分区操作，防止污染

试剂使用前充分融化并混匀

建议设置三个重复孔

废弃物应按生物安全要求处理

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