委内瑞拉马脑脊髓炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒适用于检测动物脑组织、全血等样本中的委内瑞拉马脑脊髓炎病毒（Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus, VEEV）RNA，用于该病毒感染的辅助诊断，检测结果需结合临床症状及其他实验室指标综合评估。

检验原理

采用染料法实时荧光定量RT-PCR技术，针对VEEV特异性基因序列设计引物，通过荧光信号实时监测RNA扩增过程，实现对病毒核酸的定性检测。

试剂组成

反应液：含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及荧光染料（如SYBR Green），规格为500μL/管（50T/盒）。

酶混合液：50μL/管（50T/盒）。

阳性质控品：50μL/管，含VEEV特异性RNA片段。

阴性质控品：250μL/管，无核酸酶水或阴性样本基质。

注意：不同批号组分不可混用。

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议≤5次），有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

LightCycler系列

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Realplex

样本采集与处理

组织样本：采集病死或扑杀动物的脑组织（约2g），置于无菌容器中。

全血样本：使用EDTA抗凝管采集5mL全血，避免溶血。

RNA提取：建议采用柱式法或磁珠法提取总RNA，避免降解。

操作步骤

反应体系配制：按说明书比例混合反应液、酶液及模板RNA。

PCR程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（荧光采集）

结果判读：

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型。

阴性：无扩增曲线或Ct值＞38。

注意事项

实验需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀并短暂离心。

建议每批次实验同时运行阴阳性质控。

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