边缘无浆体(无形体)染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

技术原理与特点

染料法荧光定量PCR：采用SYBR Green荧光染料，实时监测DNA扩增，通过Ct值定量分析病原体载量。

即开即用：预混优化引物、缓冲液、酶等组分，用户仅需提供DNA模板。

高灵敏度与特异性：

引物针对Anaplasma marginale高度保守区（如外膜蛋白基因MSP4/MSP5或热休克蛋白基因groEL），避免与近缘种（如Anaplasma phagocytophilum）交叉反应。

检测限可达1~10拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

质量控制：

提供阳性对照（灭活基因组DNA片段，无传染性），用于标准曲线制备及假阴性排除。

建议设置无模板阴性对照（NTC）以监控污染。

试剂盒组分

| 组分 | 功能说明 |

| qPCR预混液 | 含热启动Taq酶、dNTPs、优化缓冲体系 |

| 特异性引物对 | 靶向Anaplasma marginale保守序列 |

| SYBR Green荧光染料 | 嵌入双链DNA释放荧光信号 |

| 阳性对照DNA | 定量标准（1×10⁸拷贝/μL） |

| 模板稀释液 | 用于标准品梯度稀释 |

操作流程

样本DNA提取：推荐磁珠法（如Qiagen Blood Kit）处理抗凝全血、组织或蜱虫样本，避免抑制剂干扰。

标准曲线制备：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作以防污染。

PCR反应体系配制：

每20μL体系含预混液、引物、模板DNA（或标准品/阴性对照）。

扩增程序：

95℃预变性→（95℃变性→60℃退火/延伸）×40循环→熔解曲线分析。

结果判读：

阳性：Ct值＜35，扩增曲线呈S型；

可疑：Ct值35~40，需重复或测序验证；

阴性：无扩增曲线。

注意事项

防污染措施：严格分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离），使用带滤芯枪头。

季节性提示：冬季蜱虫活动减少，但隐性感染动物（如妊娠母畜）仍需筛查。

多重检测：可搭配其他病原体探针（如巴贝斯虫），需优化引物浓度。

公司正在出售的产品