嗜吞噬细胞无浆体(无形体)染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品基本信息

检测方法：SYBR GreenⅠ荧光定量PCR

适用样本：人源临床样本（外周血）、家畜血液样本及蜱虫样本

检测靶标：16S rRNA基因保守序列（特异性引物：1-25F/183-205R）

灵敏度：最低检测限6.4×10² copies/μL，较常规PCR敏感性高100倍

特异性：无交叉反应（排除绵羊无浆体、牛无浆体及环形泰勒虫干扰）

重复性：批内及批间变异系数<2%，稳定性高

试剂盒组分

qPCR预混液：含SYBR Green染料、dNTPs、热启动DNA聚合酶

引物混合液：特异性靶向Anaplasma phagocytophilum 16S rRNA基因

阳性对照：含重组质粒（标准曲线构建用，浓度梯度6.4×10³~6.4×10⁸ copies/μL）

阴性对照：无核酸酶水

样本裂解缓冲液（可选）：用于血液或蜱虫样本核酸提取

操作步骤

样本处理：

血液样本：EDTA抗凝外周血200 μL，使用核酸提取试剂盒提取DNA。

蜱虫样本：研磨后离心取上清，提取DNA。

反应体系配制（50 μL体系）：

预混液25 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 5 μL + 无核酸酶水18 μL。

qPCR程序：

预变性：95℃ 5 min；

扩增：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（40循环，荧光采集）；

熔解曲线分析：60℃~95℃，升温速率0.3℃/sec。

结果分析

标准曲线：以阳性对照构建，线性范围6.4×10³~6.4×10⁸ copies/μL（R²≥0.99）。

阈值设定：阈值线需高于阴性对照荧光信号，基线设为6~15循环。

判读标准：

阳性：Ct<38，熔解曲线单峰；

可疑：38≤Ct<40，需复测；

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

防污染措施：实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

质量控制：每批实验需包含阴/阳性对照，若阳性质控Ct>35或阴性质控出现扩增，实验无效。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

临床应用

疾病诊断：人粒细胞无形体病（发热、白细胞减少）、家畜贫血的早期检测。

流行病学监测：蜱虫媒介中病原体定量分析。

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