乙型脑炎（乙脑）病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术，结合特异性引物和荧光染料（如SYBR Green I），用于定性检测人血清、血浆、脑脊液（CSF）等临床样本中的乙型脑炎病毒（JEV）特异性核酸片段（如NS1, NS3, NS5, E, PrM等基因保守区域）。

辅助诊断： 为乙型脑炎的临床诊断提供实验室依据。

流行病学监测： 用于乙型脑炎疫情的病原学监测。

科研应用： 适用于相关科学研究（如适用）。

检测原理

核酸提取： 从待测样本中提取总RNA（包含病毒RNA）。

逆转录（RT）： 在逆转录酶作用下，以提取的RNA为模板，利用随机引物或特异性引物合成互补的cDNA。

荧光定量PCR： 以cDNA为模板，加入针对JEV特异性保守区域设计的引物对、热启动DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液以及荧光染料（如SYBR Green I）。

扩增： PCR循环过程中，引物特异性结合模板，DNA聚合酶催化合成新的DNA链。

荧光信号产生： 荧光染料（如SYBR Green I）能非特异地嵌入双链DNA（dsDNA）的小沟中。当dsDNA合成时，染料嵌入并发出荧光信号；当DNA高温变性解链成单链时，染料释放，荧光信号减弱。

实时监测： 实时荧光定量PCR仪在每次循环的延伸结束时检测反应管中的荧光强度。荧光信号的强度与反应体系中dsDNA产物的量成正比。

定量/定性判读： 通过监测荧光信号达到设定的阈值（Threshold）时所经历的循环数（Ct值/Cq值），可以：

定性： 判断样本中是否存在JEV核酸（Ct值 ≤ 设定的阳性判读值，且有特异性扩增曲线）。

半定量/相对定量： 结合标准品，可对病毒载量进行相对定量（需试剂盒提供标准品并建立标准曲线）。

核心性能参数

检测方法：染料法荧光定量RT-PCR技术

灵敏度：可以达到至少1000拷贝/反应

特异性：根据乙型脑炎病毒的保守基因序列设计的引物，与相关病毒无交叉反应

线性范围：用于定量检测时线性范围至少为5个数量级

重复性：板内、板间变异系数均小于15%

样本适用范围

可检测多种类型样本：

全血、血清、血浆

口腔样本、唾液、咽喉部、鼻孔、眼部样本

病毒培养物、脑脊液、脑组织匀浆等

实验操作流程

试剂准备：将试剂盒从冰箱取出，室温平衡20分钟，配制洗涤液等试剂

稀释PCR阳性对照：将阳性对照稀释成6个10倍稀释度（10E2-10E7拷贝/μL），放冰上待用

核酸提取：采用试剂盒配备的DNA抽提液或商业化的核酸提取试剂盒提取样本核酸

设置qPCR反应：在标记管中加入各成分，样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照

PCR扩增：将PCR管放置在PCR扩增仪器样品槽相应位置，进行扩增

数据采集与处理：根据仪器推荐的流程进行数据采集，绘制标准曲线并计算样品浓度

注意事项

样品采集后应及时检测，也可保存于-20±5℃待检，长期保存应置于-70℃以下，严禁反复冻融

不同批号的试剂盒组分不可交互使用

操作严格按照说明书进行，试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心

反应液应避光保存，反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧

阳性对照浓度较高，稀释操作一定要在独立的区域进行，避免污染样品或本试剂盒的其他成分

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