麦芽香肉杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，针对嗜麦芽窄食单胞菌基因组保守区域设计特异性引物，可实现高灵敏度（低至几百拷贝/反应）和特异性检测，与常见病原体无交叉反应。适用于临床样本、环境样本的定性和定量分析，线性范围覆盖至少5个数量级。

试剂盒组成

预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green荧光染料（即开即用）。

阳性对照：牛乳头瘤病毒PCR阳性对照（1×10^6拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

使用说明书（本文件）。

实验流程

1. 样本制备

样本数量：若检测N个样本，需制备N+2个反应（含1个阳性对照和1个阴性对照）。

DNA提取：推荐使用兼容的细菌DNA提取试剂盒，纯化后电泳验证质量。

2. PCR反应体系

每20μL反应体系包含：10μL预混液、2μL模板DNA、8μL无核酸酶水。

阳性对照：10μL阳性对照+10μL水（总体积与样本一致）。

阴性对照：以水替代模板。

3. 扩增程序

预变性：95℃ 5分钟。

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃递增。

4. 结果分析

定性检测：扩增曲线Ct值≤35且熔解曲线为单峰判为阳性。

定量检测：通过标准曲线计算拷贝数。

质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照Ct值在预期范围内。

注意事项

避免反复冻融试剂，预混液解冻后需涡旋混匀。

实验环境需严格分区（样本处理区、PCR扩增区），防止气溶胶污染。

若阴性对照出现扩增，表明污染，实验需终止并排查原因。

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