大片吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品特点

高灵敏度与特异性：

引物针对大片吸虫DNA高度保守区设计，避免与其他生物样本交叉反应。

采用新型荧光染料（如EvaGreen），信号强且对PCR抑制小，检测下限可达1×10^2拷贝/μL。

即开即用：

预混优化反应体系（含Hot Start Taq DNA聚合酶），用户仅需提供DNA模板。

质量控制：

提供阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照（DEPC-H2O），便于区分假阴性结果。

应用范围：

适用于科研领域的大片吸虫定性或定量检测，线性范围覆盖5个数量级（10^2~10^7拷贝/μL）。

操作流程

样本DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

标准曲线制备（可选）

标记6管，编号7至2，每管加45 μL稀释液（如DEPC-H2O）。

梯度稀释阳性对照（初始浓度1×10^8拷贝/μL），依次获得10^7~10^2拷贝/μL的标准品，冰上暂存。

反应体系配制

每20μL反应体系包含：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、酶）

正向/反向引物（终浓度0.2 μM）

模板DNA 2 μL（阴性对照以水替代）

qPCR扩增程序

预变性：95℃ 2分钟

循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

溶解曲线分析：60~95℃（仅染料法需此步骤）。

注意事项

分区操作：DNA提取、试剂配制、模板添加需在独立区域进行，避免污染。

耗材要求：使用带滤芯枪头及无核酸酶离心管。

数据判读：

阈值循环数（Ct值）≤35且溶解曲线为单一峰，判为阳性；

阴性对照Ct值应为“Undetected”。

仅限科研：不可用于临床诊断。

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