亚利桑那沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

亚利桑那沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对亚利桑那沙门氏菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性或定量检测。阳性对照为无传染性DNA片段，避免生物安全风险。

试剂组成

亚利桑那沙门氏菌扩增液（50μL×1管）

亚利桑那沙门氏菌反应液（950μL×1管）

阳性质控品（1×10^8拷贝/μL，50μL×1管）

阴性质控品（50μL×1管）

说明书（1份）

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，运输需冰袋密封，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

适用仪器

兼容ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。

自备耗材

无DNA/RNA酶的1.5mL离心管、0.2mL PCR反应管、滤芯吸头（10μL/200μL/1000μL）、离心机、移液器等。

样本要求

采集：按常规方法采集胃液分泌物、呕吐物或培养物，避免交叉污染。

保存：短期-20℃，长期-70℃（不超过6个月），运输需2~8℃冰袋。

检测方法

样本处理

按规范提取DNA，建议使用商业提取试剂盒。

阳性对照需独立操作，避免污染。

标准曲线制备（定量检测）

以10倍梯度稀释阳性对照（10^2~10^7拷贝/μL），绘制Ct值与log浓度标准曲线。

PCR扩增

反应体系：20μL（含模板DNA、反应液、扩增液）。

扩增参数（需优化）：

预变性：95℃ 2分钟

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）

结果判读

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型。

样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

定量检测：根据标准曲线计算样本DNA浓度。

注意事项

不同批号试剂不可混用。

操作分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）避免污染。

实验废弃物需按生物安全规范处理。

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