丙型副伤寒沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

丙型副伤寒沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒基于荧光定量PCR（qPCR）技术，采用染料法（如SYBR Green I）或探针法（需结合TaqMan探针）检测丙型副伤寒沙门氏菌特异性基因序列。通过实时监测荧光信号变化，定量分析样本中病原体DNA浓度。

染料法特点：

通过溶解曲线分析（Tm值）区分特异性扩增与非特异性产物，排除假阳性。

阳性判定需满足：Ct值有效且Tm值与阳性对照一致。

探针法特点（若适用）：

探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶切割释放荧光信号。

特异性更高，可减少背景干扰。

试剂盒组成

PCR预混液（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）

丙型副伤寒沙门氏菌特异性引物混合液

阳性对照（1×10^8 拷贝/μL）

超纯水（无核酸酶）

阴性对照（样品制备阴性对照、PCR阴性对照）

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，建议使用商品化核酸提取试剂盒。

反应体系配制（以40μL为例）：

模板DNA 2-5μL

PCR预混液10μL

引物混合液2μL

超纯水补足至40μL

PCR程序：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

溶解曲线分析（染料法）：60℃至95℃，每0.5℃升温1次

结果判定

定量分析：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本DNA浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤设定阈值且Tm值与对照一致。

阴性：无有效Ct值或Tm值异常。

无效实验判定：

阴性对照出现假阳性（Tm值与阳性对照一致），提示污染，需重新检测。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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