卟啉单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

卟啉单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒为即用型荧光定量PCR检测系统，采用SYBR Green I染料法，专为卟啉单胞菌（如牙龈卟啉单胞菌）的核酸定量检测设计。试剂盒包含优化的预混体系，整合反转录（RT）与定量PCR（qPCR）步骤，适用于RNA或DNA模板的高灵敏度检测，可广泛应用于科研领域。

检测原理

染料法荧光检测：SYBR Green I染料与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶标定量。

高特异性引物：针对卟啉单胞菌保守序列设计引物，避免与其他微生物交叉反应。

一体化反应：单管完成反转录与扩增，减少操作步骤和污染风险。

试剂盒组分

2×预混缓冲液：含dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液及SYBR Green I染料。

酶混合液：耐热逆转录酶（RTase）和热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：卟啉单胞菌标准品（1×10⁷拷贝/μL）。

核酸稀释液：无RNase/DNase超纯水。

使用手册（含标准曲线构建方法）。

自备材料

样本DNA/RNA提取试剂（推荐柱式纯化试剂盒）。

荧光定量PCR仪（兼容SYBR Green通道）。

无菌PCR管及移液耗材。

操作步骤

样本制备：

使用核酸提取试剂盒提取样本RNA/DNA，建议用超纯水溶解至终浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制（20 μL体系）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×预混缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 0.5 |

| 引物干粉（用户自加）| 0.4（10 μM）|

| 模板RNA/DNA | 2 |

| 超纯水 | 至20 |

反应程序：

反转录：42℃ 15分钟（RNA样本需此步骤）。

预变性：95℃ 3分钟。

扩增（40循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。

性能参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg RNA或单拷贝DNA。

线性范围：10¹~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。

保存条件：-20℃避光保存，有效期24个月；预混液4℃稳定24小时。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免核酸污染。

熔解曲线需呈现单一峰形，否则提示非特异性扩增。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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