改良安卡拉痘苗病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

改良安卡拉痘苗病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术检测改良安卡拉痘苗病毒（Modified Vaccinia Virus Ankara, MVA）的DNA含量。SYBR Green I可特异性结合双链DNA，在扩增过程中释放荧光信号，通过监测荧光强度实现病毒核酸的定量分析。

产品组成

PCR反应液：含优化引物对（针对MVA高度保守区设计）、SYBR Green I荧光染料、dNTPs、Taq DNA聚合酶及反应缓冲液。

阳性对照：含MVA靶序列的重组质粒标准品（已知浓度梯度）。

阴性对照：无核酸酶水（ddH2O）。

技术特点

高灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒DNA。

强特异性：引物经严格筛选，避免与其他病毒DNA交叉反应。

重复性好：批内及批间变异系数（CV）≤5%。

操作简便：预混反应体系，仅需加入模板DNA即可进行检测。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温干冰运输，避免反复冻融。

实验步骤

模板制备：提取待测样品DNA，建议使用柱式核酸提取试剂盒。

反应体系配制：按20μL/反应加入PCR反应液、模板DNA及对照品。

扩增程序：

预变性：95℃ 3分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

数据分析：

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品病毒载量。

定性检测：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线；

阳性：Ct≤35且曲线呈典型S型；

可疑（35<Ct<40）：需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免污染。

建议使用ROX参比染料校正孔间荧光偏差（需自备）。

若检测环境存在气溶胶污染，建议使用UDG酶防污染体系。

质量控制

阴性对照Ct值应≥40，阳性对照Ct值≤30且扩增曲线明显。

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