长双歧杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

长双歧杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品组成与特点

核心组分：

预混引物探针（针对长双歧杆菌保守基因序列设计，特异性强）

阳性对照（需单独存放，避免污染）

荧光染料（SYBR Green I）

反应缓冲液、dNTPs、热启动DNA聚合酶等。

技术特点：

高灵敏度：可检测低至1000拷贝/反应的靶标DNA。

一站式设计：无需额外配制引物或对照，减少操作误差。

溶解曲线分析：通过Tm值区分特异性扩增与非特异性产物，确保数据有效性。

实验操作流程

样本准备：

自备待测DNA模板（建议纯度A260/A280为1.8-2.0）。

反应体系配制（以20μL为例）：

模板DNA 2μL

预混PCR Master Mix 10μL

引物探针混合液 2μL

无核酸酶水补至20μL。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

溶解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃升温一次。

结果判定与注意事项

有效性验证：

阳性对照Tm值作为基准，待测样本Tm值需与之匹配，否则视为假阳性。

阴性对照（试剂空白与样本制备空白）应无扩增信号，若出现假阳性需排查污染。

定量分析：

以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

注意事项：

避免反复冻融试剂，分装后使用。

操作时需佩戴手套，防止核酸酶污染。

应用范围

适用于肠道微生物研究、食品检测、临床诊断等领域中长双歧杆菌的快速定量检测。

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