红斑丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于检测红斑丹毒丝菌（Erysipelothrix rhusiopathiae）的核酸，适用于临床样本、食品、环境样本等的定性或定量分析。试剂盒包含优化的预混反应体系，操作简便，特异性强，可快速获得检测结果。

产品组成

扩增预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。

阳性质控品：红斑丹毒丝菌特异性DNA片段。

阴性质控品：无核酸酶水。

DNA提取试剂（可选）：用于样本核酸提取。

说明书及数据分析表。

操作步骤

样本处理

采集组织、血液或环境样本，按标准方法提取DNA。

建议使用试剂盒配套提取试剂或等效方法。

PCR反应体系配制

在反应管中加入预混液、模板DNA（建议5–50 ng/μL）及阴/阳性质控品。

总体积20 μL，避免气泡产生。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40–45次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光信号采集）；

熔解曲线分析（可选）：60–95℃逐步升温。

结果分析

定性检测：通过Ct值判断阳性（Ct≤35）或阴性（无扩增曲线）。

定量检测：以标准品Ct值绘制标准曲线，计算样本初始DNA浓度。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。

试剂使用前需完全解冻并短暂离心，避光保存。

阳性质控品与待测样本需同步检测，以排除假阴性。

熔解曲线分析可验证扩增特异性（单一峰为特异性产物）。

废弃物品需经消毒处理（如10%次氯酸或75%酒精）。

储存与运输

保存条件：-20℃避光，避免反复冻融（有效期12个月）。

运输：低温干冰或冰袋。

局限性

检测结果需结合临床症状及其他实验室指标综合判断。

样本中PCR抑制剂可能导致假阴性，建议平行检测内参基因。

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