猪肠病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于猪肠病毒核酸的高灵敏度、高特异性检测。适用于临床样本、食品样本及环境样本的定性或定量分析，线性检测范围覆盖5个数量级，可满足科研及诊断需求。

组分与储存

试剂组分：预混PCR反应液（含引物、探针、dNTPs、酶等）、阳性对照（无传染性DNA片段）、阴性对照、模板稀释液。

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；反复冻融不超过3次。

操作流程

1. 样本前处理

粪便/肠道样本：取0.1 g置于无菌管中，加入1 mL PBS匀浆，离心取上清。

血液样本：EDTA抗凝血2 mL，提取血浆或白细胞层RNA。

食品样本：按微生物学检验标准预处理后提取核酸。

2. 核酸提取

建议使用商业化RNA提取试剂盒，确保无DNA污染，提取后立即检测或-80℃保存。

3. 标准曲线制备（定量检测适用）

标记6管，分别加入45 μL模板稀释液。

取5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL）加入第1管，梯度稀释至10^2-10^7拷贝/μL。

稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。

4. PCR反应体系

20 μL体系：10 μL预混液 + 2 μL模板 + 8 μL无核酸酶水。

程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）

5. 结果判读

定性：Ct值≤35且扩增曲线正常判为阳性。

定量：根据标准曲线计算拷贝数。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

阳性对照需最后加入，防止污染其他组分。

若检测环境湿度＞60%，建议使用带芯吸头。

性能参数

灵敏度：最低检出限10^2拷贝/μL。

特异性：引物针对猪肠病毒保守区设计，无交叉反应。

重复性：CV＜5%。

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