恙虫病东方体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，无需额外优化反应体系。

高灵敏性：引物及探针经优化设计，可检测低拷贝数目标序列。

内控对照：提供阳性对照（非活体DNA片段），便于区分假阴性结果。

高特异性：引物基于恙虫病东方体高度保守区设计，避免与其他病原体RNA交叉反应。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

PCR MagicMix 3.0 1mL（红盖） 含SYBR Green I染料、Taq酶等核心扩增成分

超纯水 1mL（亮黄盖） 用于稀释引物和模板

恙虫病东方体引物混合液 100μL（白盖） 特异性扩增目标基因片段

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） 50μL（黄盖） 用于实验有效性验证

使用手册 1份 详细操作指南和参数设置说明

操作流程

1. 样品DNA提取

兼容市场主流核酸提取试剂盒，也可使用试剂盒配套的DNA抽提液快速处理：

液体样本：取100μL样本→8000rpm离心3min→弃上清→加50μL抽提液混匀→100℃加热10min→13000rpm离心3min→取5μL上清作为模板

固体样本：挑取单菌落/米粒大小样本→加50μL抽提液混匀→后续步骤同上

2. 阳性对照稀释（定量检测需做）

准备6个离心管，用荧光PCR专用稀释液将阳性对照从1×10⁸拷贝/μL依次10倍稀释至1×10²拷贝/μL，建立标准曲线

3. qPCR反应体系配制（20μL）

组分 体积

PCR MagicMix 3.0 10μL

引物混合液 2μL

模板DNA（样品/对照） 5μL

超纯水 3μL

4. 扩增程序设置

预变性：95℃ 5min

PCR循环（40次）：

  变性：95℃ 15s

  退火延伸：58℃ 30s（同时采集荧光信号）

溶解曲线分析：95℃ 15s → 60℃ 1min → 95℃ 15s

结果判读标准

定性检测

阴性对照Ct值≥40，阳性对照Ct值≤30且有典型扩增曲线，实验有效

待测样品Ct值≤35：阳性

待测样品Ct值≥40：阴性

35<Ct值<40：重复实验，若仍<40则判为阳性

定量检测

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据待测样品Ct值，从标准曲线计算初始模板拷贝数

注意事项

防污染操作：阳性对照稀释需在独立区域进行，使用一次性耗材，避免气溶胶污染

试剂处理：所有试剂使用前需室温融化，充分混匀后短暂离心

避光保存：含SYBR Green I的反应液需避光，避免荧光淬灭

样本要求：全血样本需用EDTA/柠檬酸钠抗凝，组织样本需充分研磨，避免RNA酶污染

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