牛呼肠孤病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检测方法：染料法荧光定量RT-PCR

规格：50次/盒（20μL体系/次）

适用范围：科研用途，适用于牛呼肠孤病毒RNA的定性及定量检测

产品特点

即开即用：预混优化引物、探针及反应体系，用户仅需提供RNA模板。

高灵敏度与特异性：引物针对病毒高度保守区设计，避免交叉反应。

双重检测功能：支持定性（阴阳性判定）和定量（标准曲线法）分析。

内控对照：含无传染性RNA片段作为阳性对照，排除假阴性干扰。

宽线性范围：定量检测时线性覆盖至少5个数量级（如10²-10⁷拷贝/μL）。

操作流程

1. 样本前处理

使用无RNA酶环境提取样本RNA，避免降解。

2. 试剂准备

所有组分使用前需自然融化，涡旋混匀并短暂离心。

反应液需避光保存，分装至PCR管时避免气泡。

3. 加样与扩增

按20μL体系配制反应混合液（含模板RNA、引物、染料等）。

推荐程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光）

4. 标准曲线制备（定量检测）

使用10倍梯度稀释的阳性标准品（如10²-10⁷拷贝/μL）建立标准曲线，以log浓度为横轴、Ct值为纵轴。

结果判读

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线。

待测样本Ct≤35判为阳性；Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

定量检测：通过标准曲线计算样本RNA拷贝数。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止污染。

防护措施：使用一次性耗材、专用工作服及手套，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

重复实验：临界值样本或异常扩增曲线需复测确认。

存储条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

免责声明

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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