番鸭细小病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术特异性检测番鸭细小病毒核酸，适用于临床样本（如粪便、肝脏、脾脏等）或实验样本中MDPV的定性/定量分析。

检测原理

核酸提取：样本中提取病毒DNA。

PCR扩增：采用特异性引物扩增MDPV保守基因片段（如VP3基因）。

荧光信号采集：SYBR Green I染料与双链DNA结合后发射荧光，通过仪器实时监测扩增曲线。

结果分析：根据Ct值（阈值循环数）和标准曲线计算病毒载量。

主要组分

| 组分名称 | 规格（96T） | 储存条件 |

| MDPV qPCR预混液（含SYBR Green I） | 1 mL × 2管 | -20℃避光 |

| MDPV阳性对照（1×10^6 copies/μL） | 50 μL | -70℃ |

| MDPV阴性对照（无核酸水） | 50 μL | -20℃ |

| DNA提取试剂（可选） | 1套 | 室温 |

自备材料

实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）

无菌无核酸酶离心管、吸头

样本DNA提取试剂（若未包含）

操作步骤

1. 样本处理

按常规方法提取样本DNA，建议使用商品化DNA提取试剂盒。

2. PCR体系配制（50 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR预混液 | 25 |

| 上游引物（10 μM） | 2 |

| 下游引物（10 μM） | 2 |

| 模板DNA | 5 |

| 无核酸酶水 | 补至50 |

3. PCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 否 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | 否 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | 是 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：无Ct值或Ct值＞38，扩增曲线无显著上升。

临界值：35＜Ct≤38，建议重复检测。

注意事项

试剂盒仅用于科研或兽医诊断，非临床医用。

避免反复冻融试剂，预混液解冻后需避光保存。

操作时严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），防止污染。

性能参数

灵敏度：最低检测限10 copies/μL

特异性：不与鹅细小病毒、鸭瘟病毒等交叉反应

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