溶组织梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

溶组织梭状芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于检测溶组织梭状芽孢杆菌（Clostridium histolyticum）的核酸，具有高灵敏度和特异性，适用于科研用途。

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，操作简便。

高灵敏度：引物和探针经优化设计，检测灵敏度显著高于常规PCR。

高特异性：引物靶向溶组织梭状芽孢杆菌高度保守区域，避免与其他微生物发生交叉反应。

内置对照：提供无传染性的DNA片段作为阳性对照，有效区分假阴性结果。

宽动态范围：定量检测线性范围覆盖至少5个数量级（如10²~10⁷拷贝/μL）。

环保设计：一管式封闭操作，降低污染风险。

操作流程

一、阳性对照稀释（用于定量检测）

标记6个离心管，编号为2-7

每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液

在7号管中加入5μL阳性对照，震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准品

依次倍比稀释，得到1×10E6至1×10E2拷贝/μL的系列标准品，放冰上备用

二、样品DNA制备

设置N+2个提取样本（N为待测样品数，另加1个阳性对照和1个阴性对照）

可使用试剂盒赠送的DNA病毒裂解液或自行选择DNA提取试剂盒纯化样品

避免样本间交叉污染，操作全程需无菌

三、qPCR反应体系配制（20μL体系）

成分 样品管/对照管 标准品管

2×qPCR MagicMix 10μL 10μL

PCR引物混合液 2μL 2μL

样品DNA/水/标准品 8μL 8μL（对应浓度）

四、PCR扩增程序

预变性：94℃ 3-5分钟

循环反应（35-40次）：

变性：94℃ 30秒

退火：55℃ 30秒（采集荧光信号）

延伸：72℃ 30秒

最终延伸：72℃ 7-10分钟

五、结果判定

定性检测：有Ct值且扩增曲线正常为阳性，无Ct值为阴性

定量检测：以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样品中DNA浓度

注意事项

操作前需穿戴实验服、手套和口罩，避免污染

阳性对照稀释需在独立区域进行，防止污染其他试剂

所有实验废弃物需按生物安全要求处理

样本采集后若不能立即检测，可置于2-8℃冷藏过夜，长期保存需-80℃冻存

不同试剂盒可能存在操作差异，请严格按照对应说明书操作

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