兔粘液瘤病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

兔粘液瘤病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

即开即用：用户仅需提供病毒DNA模板，无需额外配制主反应混合液。

高特异性：基于兔粘液瘤病毒保守序列设计的引物，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限为数百拷贝/反应。

闭管检测：一管式荧光定量PCR，避免开盖污染。

标准化对照：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），支持定量与定性分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 备注 |

| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） | 含荧光染料、dNTPs、酶等 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 用于标准品梯度稀释 |

| 兔粘液瘤病毒引物混合物 | 100μL（白盖） | 特异性引物与探针 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL）| 50μL（红盖） | 非活体DNA片段 |

| 使用手册 | 1份 | 含操作流程与数据分析方法 |

自备试剂：DNA模板、10×ROX（依机型需求）。

实验步骤

1. 阳性对照稀释（6个梯度）

标记离心管（7号至2号），每管加45μL稀释液。

7号管加入5μL原液（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀得1×10^7拷贝/μL，依次稀释至1×10^2拷贝/μL。

2. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积 |

| 2×qPCR MagicMix | 10μL |

| 引物混合物 | 0.8μL |

| 模板DNA | 2μL |

| ROX（依机型） | 0.4μL |

| ddH₂O | 6.8μL |

3. 扩增程序

预变性：95℃ 3分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）。

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线；

阳性：Ct≤35且呈典型S型曲线；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测确认。

注意事项

操作分区进行，避免污染。

阳性对照为DNA片段，不可用于活病毒实验。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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