人Thioredoxin-1elisa试剂盒 新品

人Thioredoxin-1elisa试剂盒

一、技术原理与创新特性

高特异性检测体系：

双抗体夹心设计：采用抗人Trx-1单抗（克隆ADF 11）作为捕获抗体，结合HRP标记检测抗体（克隆2B1）靶向Cys73活性中心

氧化还原状态检测：通过特殊还原缓冲液可区分还原型（active）与氧化型（inactive）Trx-1

抗干扰优化：添加5mM DTT可防止样本中Trx-1二聚体形成

2025年技术升级：

新增胞内/胞外Trx-1分型检测功能

标准品溯源至日本JCRB细胞库（JCRB9065）

采用电化学发光技术（ECL）提升灵敏度10倍

二、试剂盒配置与关键参数

标准组件清单：

预包被96孔板（12条×8孔独立包装，充氩气保存）

重组人Trx-1标准品（7梯度：0.05-20 ng/mL，NIST可溯源）

检测系统：

钌标记二抗（4℃避光稳定12个月）

TPA电化学发光底物

专用裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂cocktail）

性能指标：

参数  规格  生物学意义

检测范围  0.05-20 ng/mL  涵盖胞内外浓度范围

灵敏度  0.015 ng/mL  可检测早期氧化应激

精密度  板内CV<4%，板间CV<7%  满足GLP要求

特异性  与Trx-2交叉反应<0.01%  确保检测准确性

三、实验操作标准化流程

样本处理关键点：

细胞样本：建议使用非还原性裂解液（避免破坏二硫键）

血浆制备：EDTA抗凝优于肝素（防止金属离子干扰）

稳定性数据：

4℃保存≤48小时（需添加10mM NEM）

-80℃可保存1年（避免反复冻融）

优化操作步骤：

样本预处理：含5mM碘乙酰胺的PBS阻断游离巯基

加样策略：采用之字形加样顺序

关键孵育：37℃微孔板振荡器（700rpm）孵育90分钟

信号读取：MSD电化学发光仪（积分时间500ms）

四、临床应用与科研价值

疾病关联阈值：

ARDS诊断：BALF中Trx-1 >8 ng/mL预示死亡率升高

肝癌筛查：血清水平 >15 ng/mL联合AFP提高早期诊断率

糖尿病并发症：氧化型/还原型比值 >0.6提示微血管病变

2025年研究突破：

发现Trx-1通过TXNIP-NLRP3轴调控细胞焦亡

重组人Trx-1（rhTrx）治疗辐射损伤进入II期临床

单细胞质谱揭示神经元亚群特异性Trx-1表达模式

五、质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线要求：5参数拟合R2≥0.995

必检参数：

空白信号<800 RLU

质控品回收率92-107%

故障排除指南：

异常现象  可能原因  解决方案

信号漂移  温度波动  使用带PID控制的孵育箱

孔间差异  板条变形  检查包装是否完好，更换新板

背景升高  洗涤不彻底  增加洗涤液体积至300μL/孔

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。