人Periostinelisa试剂盒

人Periostinelisa试剂盒

产品简介:

Periostin（骨膜蛋白）是一种细胞外基质蛋白，在骨形成、组织修复、纤维化和肿瘤微环境中发挥重要作用。本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，可高灵敏度定量检测人血清、血浆、组织匀浆等样本中的Periostin水平，适用于纤维化疾病、肿瘤研究和骨代谢研究。

2. 检测原理

方法：双抗体夹心ELISA

检测范围：0.156-10 ng/mL（典型范围）

灵敏度：<0.078 ng/mL

检测时间：约4小时

样本类型：

血清（推荐）

血浆（EDTA/肝素抗凝）

细胞培养上清

组织匀浆（需特殊处理）

. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件

预包被微孔板（抗人Periostin抗体）  96孔  2-8℃

重组人Periostin标准品  冻干粉（0-10 ng/mL）  -20℃

生物素化检测抗体  100μL  -20℃

SA-HRP结合物  12mL  2-8℃

TMB底物  10mL  2-8℃（避光）

终止液（2M H?SO?）  12mL  室温

20×洗涤缓冲液  50mL  室温

样本稀释液  20mL  2-8℃

4. 样本处理

血清/血浆：

采集后30分钟内离心（3000g，10min）

避免溶血和脂血

-80℃可长期保存（避免反复冻融）

组织样本：

用PBS匀浆后离心取上清

建议蛋白浓度调整至1-2mg/mL

5. 操作步骤

标准品复溶：用去离子水溶解，梯度稀释

加样：100μL/孔，37℃孵育2小时

洗涤：自动洗板机洗5次（每次浸泡30秒）

加检测抗体：50μL/孔，37℃1小时

加酶结合物：37℃30分钟

显色：TMB反应15分钟（精确计时）

终止：50μL终止液/孔

检测：450nm读数（参考波长630nm）

6. 数据分析

标准曲线：四参数logistic拟合（R2>0.99）

计算：根据标准曲线计算浓度，乘以稀释倍数

质控要求：

空白孔OD值<0.1

最高标准品OD值>1.5

7. 临床应用

纤维化疾病：

特发性肺纤维化（IPF）监测

肝纤维化评估

肿瘤研究：

乳腺癌、肺癌微环境研究

肿瘤转移预测

骨代谢：

骨折愈合监测

骨质疏松研究

过敏性疾病：

哮喘生物标志物

公司正在出售的产品：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。